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R.E.D. Laboratories ofrece
Prueba Phelix Phage: una forma innovadora de detectar bacterias intracelulares y una respuesta para personas enfermas sin diagnóstico
¿Qué son los bacteriófagos?
Los fagos pertenecen a la forma de vida más simple y primitiva (virus). Son extraordinariamente específicos para el huésped bacteriano al que infectan para propagarse. Pueden infectar rápidamente a su huésped e insertar su material genético en él. Como resultado, producen grandes cantidades de copias que pueden infectar aún más (y en algunos casos específicos diezmar) a las bacterias que causan la infección. También pueden hacer que las bacterias sean vulnerables al tratamiento clásico alterando su material genético.
Lo más importante es que los bacteriófagos pueden tener capacidad de eliminación. Los fagos son tan pequeños que pueden penetrar y eventualmente interrumpir los biofilms bacterianos. Estos biofilms son una barrera importante utilizada por las bacterias contra los antibióticos y, por lo tanto, un contribuyente importante a la resistencia a los antibióticos. La capacidad de los fagos para penetrar los biofilms les permite propagarse a altos niveles en los centros localizados de la infección bacteriana y destruir las bacterias dentro de ellos, produciendo un efecto terapéutico fuerte pero altamente localizado.
Los bacteriófagos son ubicuos y forman parte del 'ecosistema' natural de los ciclos de vida y reproducción bacterianos. Hemos decidido centrarnos en los bacteriófagos como objetivo para la detección directa de una infección, ya que son específicos y superan en número a la población bacteriana patógena.
Inventores:
Doctor Jinyu Shan (University of Leicester)
Profesor Martha Clokie (University of Leicester)
Doctor Louis Teulières (Phelix)
Phelix Phage Test también está disponible para detectar una amplia gama de Rickettsias: Rickettsia japonica (múltiples cepas); Rickettsia heilongjiangensis (múltiples cepas); Rickettsia parkeri (múltiples cepas); Rickettsia raoultii (múltiples cepas); Rickettsia rickettsia (múltiples cepas); Rickettsia slovaca (múltiples cepas); Rickettsia montanensis; Rickettsia pavo real; Rickettsia africanae; Rickettsia conorii.
Prueba Phelix Phage Borrelia - Publicaciones científicas
Apuntando a los genes de profagos multicopia para aumentar la detección deBorrelia burgdorferi Sensu Lato (s.l.), the Causative Agents of Lyme Disease, in Blood.
Shan J, Jia Y, Teulières L, Patel F, Clokie MRJ.
Front Microbiol. 2021 Mar 15;12:651217. doi: 10.3389/fmicb.2021.651217. PMID: 33790883; PMCID: PMC8005754.
Combinando la ciencia ciudadana y los métodos de diagnóstico molecular para investigar la prevalencia deBorrelia burgdorferi s.l. and Borrelia miyamotoi in tick pools across Great Britain.
Shan J, Jia Y, Hickenbotham P, Teulières L, Clokie MRJ.
Front Microbiol. 2023 Apr 26;14:1126498. doi: 10.3389/fmicb.2023.1126498. PMID: 37180256; PMCID: PMC10169747.
Overcoming the Challenges of Lyme Disease Diagnosis: The Role of Phage-based Testing.Jia Y, Mijatovic T, Teulières L, Clokie M, Shan J. Medical Research Archives, [S.l.], v. 11, n. 11, nov. 2023. ISSN 2375-1924. Available at: <https://esmed.org/MRA/mra/article/view/4650>. Date accessed: 16 jan. 2024. doi: https://doi.org/10.18103/mra.v11i11.4650.
Animación del ciclo de vida de los fagos del Dr. Teulières 2020
Para obtener más información sobre los bacteriófagos en general, vea este video:L’incroyable histoire des tueurs de bactéries ARTE 22
Dr Louis Teulières Actualización de la prueba de Phelix Phage Borrelia
Dr Louis Teulières Prueba de Phelix Phage Borrelia en FR actualización
Dr Louis Teulières presenta la prueba de bacteriófagos (Phage) Borrelia
Dr Louis Teulières présent les bactériophages borrelia test
¿Por qué usar bacteriófagos como herramienta de diagnóstico?
Las infecciones transmitidas por garrapatas están aumentando a nivel mundial: la enfermedad de Lyme está entre las infecciones transmitidas por vectores más prevalentes en los EE. UU. y Europa y está alcanzando niveles epidémicos (Kugeler et al. 2015; Sykes et al. 2014). Si bien la mayoría de las garrapatas tienen la capacidad de transmitir varios patógenos que causan enfermedades en los seres humanos, la enfermedad de Lyme es la enfermedad transmitida por garrapatas más conocida y es causada por bacterias del género Borrelia; típicamente Borrelia burgdorferi, que son bacterias espiroquetas gramnegativas.
Borrelia are divided into “genospecies”; among the most common include B. burgdorferi sensu stricto, B. garinii, B. afzelii, B. spielmanii, B. bavariensis y el recién identificado B. miyamotoi. The overall high failure rate of tick-borne infection (TBI)-related testing underscores the necessity for novel approaches, i.e. not relying on serology and two-tier testing.
Los ensayos basados en PCR se utilizan con mayor frecuencia en entornos clínicos y tienen varias ventajas distintas sobre la serología. Detectan la presencia de agentes infecciosos de manera directa. A diferencia de la serología, no dependen del desarrollo de anticuerpos, que pueden tardar varias semanas, y no todos los pacientes pueden desarrollarlos. Sin embargo, las pruebas de PCR también tienen limitaciones: las pruebas de ADN no distinguen entre organismos vivos y muertos.
El concepto es que ya no buscamos la bacteria sino su bacteriófago obligatorio, que busca encontrar la bacteria para sobrevivir. El material genético del bacteriófago es específico de la bacteria con la que está asociado. Esto significa que las diferentes especies de bacterias tendrán diferentes bacteriófagos.
Los bacteriófagos están presentes solo en infecciones bacterianas activas; por lo tanto, una prueba basada en fagos es una prueba directa de una infección activa. El cuello de botella actual en las PCR que detectan Borrelia es su baja sensibilidad. Hemos desarrollado un método directo y específico que es más sensible. Nuestro método de detección (Patentado por Phelix R&D y la Universidad de Leicester, WO2018083491A1) consiste en detectar la presencia de profagos superados en número que forman parte del ciclo lisogénico bacteriano.
Más precisamente, una forma de aumentar la sensibilidad de un ensayo de PCR es aumentar el número de blancos de PCR. A diferencia de los métodos de PCR actuales en el diagnóstico de la enfermedad de Lyme que amplifican regiones del ADN genómico bacteriano que tienen solo una copia en cada bacteria (como el gen ARNr 16S bacteriano, el gen RecA y la región intergénica 5S-23S), proponemos un ensayo de PCR basado en fagos más sensible para detectar la enfermedad de Lyme y la fiebre recurrente causadas por Borrelia burgdorferi sensu lato. Para hacer esto, apuntamos a una secuencia de ADN de fagos específica de todas las especies de Borrelia: enfermedad de Lyme y fiebre recurrente
Nuestros proyectos actuales basados en fagos ahora se centran en una serie de otras bacterias conocidas por estar involucradas en infecciones bacterianas crónicas como Rickettsia, Bartonella, Sutterella y Mycoplasma. Los bacteriófagos podrían convertirse en una herramienta de diagnóstico basada en el principio de que si hay fagos es porque hay bacterias vivas. Los fagos están en el torrente sanguíneo buscando desesperadamente bacterias, porque si no las encuentran, morirán. Y son mucho más numerosos que las bacterias (hay de 10 a 100 bacteriófagos por bacteria).
Este enfoque ofrece una mayor sensibilidad debido al hecho de que hay muchos más fagos circulantes en comparación con las bacterias, por lo tanto, es más preciso y más sensible que las pruebas de PCR convencionales que son frecuentemente negativas debido a la baja concentración bacteriana en la sangre. También es una prueba DIRECTA, que evidencia el propio material genético bacteriano en el cuerpo, en contraste con todas las pruebas indirectas existentes (ELISA, Western BLOT, prueba LTT / ELISPOT). En segundo lugar, permite diferenciar entre los diferentes subtipos de bacterias (B. burgdorferi s.l., B. miyamotoi, ...), así como las fiebres recurrentes. Finalmente, esta prueba también es la mejor opción para la detección temprana (recuerde que los anticuerpos tardan varias semanas en aparecer....).
¿Qué es la prueba Phelix Phage?
La prueba Phelix Phage (patente n° WO2018083491A1) se realiza en sangre completa, pero también se puede utilizar para cualquier otro material sospechoso de contener un patógeno dado (como biopsia, líquido de punción de una articulación inflamada, líquido cefalorraquídeo o garrapatas). El primer paso es extraer el ADN utilizando un método manual específico para garantizar la mejor recuperación del ADN del patógeno. El ADN extraído se somete a qPCR utilizando cebadores y sondas patentados para la detección específica de un fago. Los fragmentos amplificados se analizan posteriormente mediante secuenciación para confirmar la positividad de la muestra (es decir, descartar muestras falsas positivas). Phelix Phage test (patent n° WO2018083491A1) is performed on whole blood, but can be also used for any other material suspected to contain given pathogen (like biopsy, punction liquid from a swollen joint, cerebrospinal fluid or ticks). The very first step is to extract DNA using a specific manual method to ensure the very best recovery of pathogen DNA. The extracted DNA undergoes qPCR using patented primers and probes for a specific phage detection. Amplified fragments are further analyzed by sequencing in order to confirm the positivity of the sample (i.e. to rule out false positive samples).
Esta técnica se aplica ahora por primera vez para la detección deBorrelia (B. burgdorferi s.l. y opcionalmente B. miyamotoi, B. hermsii, B. duttonii, etc). This technique is now tested for other tick- borne diseases (Bartonella, Rickettsia, etc). In order to further improve the assay, we are now testing the same procedure on urine samples. In line with this, all patients are receiving, in the testing kit, 2 EDTA tubes for the whole blood along with one container for the first morning urine. We aim to compare the test sensitivity between blood and urine and if this trial is conclusive it will enable a testing on urine and will thus bypass invasive blood draw, enabling easier testing for all patients and especially children. The test price comprises and supports this ongoing research and development.
Significado
Es importante analizar el resultado de la prueba dentro del contexto clínico de la persona examinada. El resultado de la prueba de PCR de fagos se informa como positivo o negativo. En algunas situaciones, también puede informarse como 'límite'; esto significa que solo se encontraron pequeños fragmentos de ADN (como consecuencia de la apoptosis aumentada, la resolución de la infección, etc.). Un resultado positivo significa que en el momento de la prueba, el paciente tenía Borrelia presente en su cuerpo. Un resultado positivo en ausencia de síntomas sugiere que, a pesar de la presencia de bacterias, el sistema inmunológico parece controlar la situación. En el caso de un resultado positivo después de un diagnóstico serológico reciente o anterior, es importante discutir sobre la posibilidad de una etapa tardía / síndrome post-lyme o forma crónica de borreliosis. It is important to analyze the test result within the clinical context of the tested person. PCR Phage test result is reported as positive or negative. In some situation, it can be reported also as “borderline”; this means that only small DNA fragments were found (as a consequence of increased apoptosis, resolving infection, etc). A positive result means that at the time of the test, the patient had Borrelia present in its body. Positive result in absence of symptoms suggests that, despite the presence of bacteria, the immune system seems to control the situation. In the case of a positive test after a recent or previous serological diagnosis, it is important to discuss about the possibility of a late stage/ post-lyme syndrome or chronic form of borreliosis.
Un resultado negativo significa que en el momento de la prueba y en una muestra dada, no se evidenció la presencia de Borrelia. Es importante recordar que en etapas tardías, el número de bacterias es muy bajo y en su mayoría están ocultas en los tejidos; en consecuencia, el número de fagos circulantes también será bajo. Es recomendable volver a realizar la prueba en el período en que se observe el empeoramiento de los síntomas. Recuerde que las garrapatas portan y transmiten muchos otros patógenos (Bartonella, Rickettsia, Anaplasma, etc.) que dan síntomas muy similares.
Por lo tanto, un resultado negativo de la prueba de Borrelia con síntomas persistentes podría sugerir la presencia de otros patógenos. Por último, también es importante recordar que en etapas tardías, los síntomas reflejan disfunciones inmunes y gastrointestinales profundas como consecuencia de enfermedades transmitidas por vectores no tratadas previamente. La inflamación crónica y las infecciones de bajo grado son las complicaciones resultantes de enfermedades transmitidas por vectores no detectadas y, por lo tanto, deben abordarse además de la prueba de presencia de un patógeno específico.
Prueba Phelix Phage Borrelia
